NEJM：张锋团队发布简易CRISPR新冠检测2.0版 提高检测灵敏度

来源：药明康德　

今日，Broad研究所的著名学者张锋教授和合作伙伴一起，公布了他们进一步改良的基于CRISPR技术的新冠病毒简易检测流程。这一流程被称为STOPCovid.V2，此前，张锋团队和其合作伙伴已经公布了称为STOPCovid的简易新冠病毒检测流程，这一流程不需要从患者样本中纯化RNA，并且将检测新冠病毒所需的化学反应步骤在一个试管中完成。

2.0版的STOPCovid在原有检测的基础上更进一步，在样本制备的过程中通过加入磁珠富集样本中的RNA，从而通过提高PCR反应的起始RNA数量，进一步提高了STOPCovid.V2的检测灵敏度。

在最初的STOPCovid检测流程中，张锋团队将扩增RNA数目的等温PCR步骤和使用Cas酶检测新冠病毒特定序列的化学反应合并在同一个试管中进行。这一检测步骤不需要复杂仪器，只需要在60摄氏度的恒温反应，就可以通过侧流试纸读出检测结果。然而，在进一步检测中，研究人员发现，这一简易版流程只能发现60.5%传统RT-PCR检测出的阳性患者。

为了提高检测的灵敏度，STOPCovid.v2的流程中加入了通过磁珠富集鼻咽拭子中新冠病毒RNA的步骤，使用普通实验室中用于富集RNA的磁珠，研究人员可以收集鼻咽拭子中包含的所有病毒RNA作为反应的起始材料，而且研究人员同时精简了磁珠富集RNA的操作步骤，去除了乙醇清洗和洗脱过程，让整个RNA富集过程不超过15分钟。

▲STOPCovid.V2的操作流程（图片来源：参考资料[1]）

在华盛顿大学进行的一项设盲检测中，研究人员检测了STOPCovid.V2检验202个新冠病毒阳性和200个新冠病毒阴性鼻咽拭子样本的结果。研究人员发现，STOPCovid.V2能够达到93.1%的灵敏度和98.5%的特异性。阳性样本只需15-45分钟就能获得结果。

▲STOPCovid.V2的检测结果，B：新冠病毒阳性样本；C：新冠病毒阴性样本，红色虚线为判断样本为阳性还是阴性的阈值（图片来源：参考资料[1]）

研究人员在文章中表示，这一简化版的STOPCovid.V2流程适于没有复杂仪器的临床实验室使用。同时，研究人员还开发了一款智能手机APP，帮助检测人员对侧流试纸的结果进行解读。

参考资料：

[1] Joung et al, (2020). Detection of SARS-CoV-2 with SHERLOCK One-Pot Testing. NEJM, DOI: 10.1056/NEJMc2026172